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Elabscience葉酸/維生素B9(FA/VB9)ELISA試劑盒怎么用?

 更新時間:2023-12-28 點(diǎn)擊量:549

Elabscience葉酸/維生素B9(FA/VB9)ELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中FA/VB9濃度。那么你知道Elabscience葉酸/維生素B9(FA/VB9)ELISA試劑盒怎么用嗎?讓我們一起來看看吧!

一、檢測前準(zhǔn)備工作

1. 提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(18-25℃)。如果試劑盒需分 多次使用,請僅取出本次實(shí)驗(yàn)所需的酶標(biāo)板條和試劑,剩余板條和試劑需 按照zhi定條件保存。

2. 洗滌液:將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:24)。提示:從冰箱中取出的濃縮洗 滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶wan全溶解后 再配制洗滌液。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品工作液:將標(biāo)準(zhǔn)品于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1 mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,輕輕混勻,避免起泡,配成100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作液(或加入1mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液后,靜置1-2分鐘,用低速渦旋儀充分混勻。可通過低速離心去除渦旋過程中產(chǎn)生的氣泡)。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋。建議配制 成以下濃度:100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0 ng/mL。倍比稀釋方法:取7支EP管,每管中加入500 μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液,從100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作液中吸取500 μL到第一支EP管中混勻配成50 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作液,按此步驟往后依次吸取混勻。如下圖。提示:最后一管直接作為空白孔,不需要再從倒數(shù)第二管中吸取液體。倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用。

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4. 生物素化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以50 μL/孔計算),實(shí) 際配制時應(yīng)多配制100-200 μL。使用前15分鐘,將濃縮生物素化抗體于 800×g離心1分鐘,以生物素化抗體稀釋液將100×濃縮生物素化抗體稀釋成 1×工作濃度(例如:10 μL濃縮液+990 μL稀釋液)。現(xiàn)配現(xiàn)用。

5. HRP酶結(jié)合物工作液:HRP酶結(jié)合物為HRP酶結(jié)合親和素。實(shí)驗(yàn)前計算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100 μL/孔計算),實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200 μL。使用前15分鐘,將濃縮HRP酶結(jié)合物于800×g離1分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液將100×濃縮HRP酶結(jié)合物稀釋成1×工作濃度(例如:10 μL濃縮液+990 μL稀釋液)。現(xiàn)配現(xiàn)用。

二、操作步驟:

1. 分別設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔和樣本孔。標(biāo)準(zhǔn)孔加入50 μL 倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品,空白孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品&樣本稀釋液,其余孔加入50 μL 待測樣本(建議所有的待檢樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在檢測中設(shè)立復(fù)孔;建議通過預(yù)實(shí)驗(yàn)或咨詢技術(shù) 支持確定待檢樣本的稀釋倍數(shù))。立即每孔加入配好的生物素化抗體工作液50 μL。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育45分鐘。提示:加樣時將樣品加于酶 標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,避免產(chǎn)生氣泡。加樣時間宜控制在10分鐘內(nèi)。

2. 甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干。每孔加洗滌液350 μL,浸泡1分鐘,吸去或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,拍干。重復(fù)此洗板步驟3次。提示:此處與其他洗板步驟都可使用洗板機(jī)。洗板完成后請立即進(jìn)行下步操作,不要讓微孔板干燥。

3. 每孔加 HRP 酶結(jié)合物工作液100 μL,酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育30分鐘。 4. 甩盡孔內(nèi)液體,洗板5次,方法同步驟 2。

5. 每孔加底物溶液(TMB) 90 μL,酶標(biāo)板加上覆膜,37℃避光孵育 15 分鐘左右。提示:根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(前4個顯色孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度),即可終止。提前15分鐘打開酶標(biāo)儀預(yù)熱。

6. 每孔加終止液50 μL,終止反應(yīng)。提示:終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

7. 立即用酶標(biāo)儀在450 nm波長測量各孔的光密度(OD 值)。

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