Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)培養(yǎng)基作為細胞培養(yǎng)領域的重要組成部分,其配方的設計直接關系到細胞在體外環(huán)境中的生長和繁衍。本文將剖析DMEM培養(yǎng)基的配方,逐一解讀其中每一成分的作用,為科研人員提供詳實的培養(yǎng)基配方指南。
DMEM培養(yǎng)基配方成分詳解:
★基礎培養(yǎng)基:
DMEM(Dulbecco改良的Eagle培養(yǎng)基)是一種廣泛使用的基礎培養(yǎng)基,可用于支持多種不同的哺乳動物細胞生長。原始的DMEM培養(yǎng)基配方中葡萄糖濃度為(1 g/L),DMEM高糖培養(yǎng)基包含4500 mg/L的D-葡萄糖,其提供了培養(yǎng)基的基礎結構,是營養(yǎng)的主要來源。
★緩沖劑:
碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)(3.7 g/L),其使得DMEM高糖培養(yǎng)基能夠5–10% CO2的環(huán)境來維持生理pH值。
Hepes緩沖液:調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值,確保適宜的酸堿平衡。
★氨基酸和維生素:
L-谷氨酰胺是細胞生長的必須氨基酸,為培養(yǎng)的細胞提供重要的能量來源,能促進細胞生長,有助于細胞存活;
L-胱胺酸(Cystine)為蛋白質(zhì)和氨基酸代謝提供基礎。
L-蛋氨酸是轉甲基化和轉硫的前體。
維生素B群、維生素C和維生素E可滿足細胞對維生素的需求。
抗生素(通常為青霉素和鏈霉素)可預防微生物污染。
★生長因子(可選):
表皮生長因子(EGF)和胰島素樣生長因子(IGF):可根據(jù)需要添加,促進特定細胞類型的增殖。
如果需要,可以在DMEM中添加生長因子。但是添加的生長因子類型和數(shù)量應根據(jù)特定的細胞類型和實驗需求來確定。是否在DMEM中添加生長因子,以及添加哪種生長因子,取決于實驗的具體需求和實驗目標。
以上僅列出DMEM培養(yǎng)基部分配方成分,對不同細胞培養(yǎng),可以根據(jù)細胞特性自行調(diào)整DMEM培養(yǎng)基配方。通過深入理解DMEM培養(yǎng)基的配方,科研人員可以更好地根據(jù)實驗需求進行調(diào)整,為細胞提供精準、有針對性的培養(yǎng)環(huán)境。中科百抗的DMEM培養(yǎng)基包含4.5 g/L葡萄糖、酚紅、L-谷氨酰胺和110 mg/L丙酮酸銨,以磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)作為緩沖液,不含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或生長因子的配方,因此在使用時需要額外補充10%的胎牛血清(FBS),以確保細胞得到充足的營養(yǎng)和生長所需的支持。